Кусочек ткани для световой микроскопии фиксировался в течение 12-24 ч, обезвоживался и заливался в парафин. Кусочки для заливки в эпоксидные смолы после фиксации в 4%-ном растворе параформальдегида промывались в трех порциях фосфатного буфера Миллонига (рН 7,2-7,4) в течение 30 мин. Далее следовала фиксация в 1%-ном растворе четырехокиси осмия в течение 1,5-2 ч. После фиксации кусочки быстро промывали в двух сменах буферного раствора, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации, проводили через эфир (или пропиленоксид) и заливали в эпоксидные смолы. Мы пользовались смесью эпона. Если возникала необходимостьотложитьпроводку биоптатов, мы хранили материал в 4%-ном растворе параформальдегида при температуре 4°С, контролируя величину рН. С парафиновых блоков готовились срезы толщиной 3-5 мкм. С каждого блока, залитого в эпоксидные смолы, вначале готовились полутонкие срезы (1 мкм), а затем ультратонкие. Полутонкие срезы окрашивали толуидиновым синим или азуром-2. Применялись 1%-ные растворы красителей, приготовленные на 1%-ном водном растворе буры, которая повышает рН до 9. Раствор красителя перед окраской подогревался до 60-70°С на водяной бане. Окрашивали капельно в течение 10 мин, споласкивали в двух порциях дистиллированной воды, после чего срезы высушивались в течение суток при комнатной температуре, затем около 4-5 мин просветлялись в ксилоле и заключались в полистерол. Для ультратонких срезов использовался классический метод двойного окрашивания цитратом свинда и урапилацетатом. При необходимости проводили реакцию с рутениевым красным для выявления внеклеточных кислых мукоидов (гликокаликса). Использовали метод Люфта но прописи Гайера (1974). В этих случаях часть биоптата фиксировали 1 ч при 4°С в 3,6%-ном растворе глютаральдегида (0,5 мл), 0,3%-ном водном растворе рутениевого красного (0,5 мл) и 0,5 М какодилатном буфере с рН 7,3 (0,5 мл).
читать далее
Метахроматическая лейкодистрофия
Большое место отводится исследованию энзимов в моче при диагностике некоторых наследственных заболеваний обмена веществ, развивающихся в результате определенного энзимного дефекта. Доступность мочи как материала для исследования представляет большое преимущество. Неоднократное установление выраженного понижения и отсутствия энзимной активности подтверждает диагноз следующих заболеваний: — метахроматическая лейкодистрофия — по отсутствию арил-сульфатазы А в моче, исследование этого энзима все […]
Метод авторадиографии
Методом авторадиографии выявлена определенная специфика периода дробления и в отношении длительности различных периодов митотического цикла. Например, в ходе дробления у морского ежа полностью отсутствует период Gu а период S занимает лишь часть цикла. Преобладающую часть цикла составляют премитотический период G2 и митоз (Hinengardner, Rao. a. Feldman, 1963). Отсутствие периода G4 (начиная со второго деления дробления) […]
Энзимный блок
Энзимный блок затрагивает разложение церамидлактозида до церамидглюкозида и связан с врожденным энзимным дефектом в лизосомном энзиме церамидлактозид-6-галактозидазы. Болезнь Krabbe. Церамидгалактозидлипидоз. Шаровидная лейкодистрофия Заболевание редкое, с фатальным прогрессирующим течением. Характеризуется умеренным накоплением галактоцереброзида в белом веществе мозга, почках, печени и селезенке, в лейкоцитах и других тканях. В ткани мозга наблюдается демиелинизация, астроцитный глиоз и почти полное […]